Sterilizace vzduchu a vybavení v mikrobiologické laboratoři: Metody a zařízení

Práce v mikrobiologické laboratoři se v mnoha ohledech značně liší od práce v jiných laboratořích. Mikrobiolog pracuje s živými mikroorganismy, jejichž požadavkům musí podřídit jak metodiku práce, tak vybavení laboratoře.

K provádění mikrobiologických rozborů je nutné pořídit základní přístrojové vybavení určené pro mikrobiologické pracoviště. Na pracovním stole ponecháváme trvale pouze ty pomůcky, které běžně používáme. Méně používané pomůcky uložíme do zásuvek stolu a udržujeme v pořádku a čistotě. U stolu má být kulatá otáčecí židle. Laboratorní skříně jsou určeny na chemické, mikrobiologické pomůcky, na chemikálie, na sušené, konzervované univerzální živné půdy a na některé přístroje.

Základní vybavení mikrobiologické laboratoře

Mezi základní a nejdůležitější přístroje a zařízení v mikrobiologické laboratoři patří: mikroskop, termostaty, chladnička, autokláv, Kochův parní sterilizátor, analytické váhy, homogenizátor, automatická třepačka. Podle oboru a zaměření může být mikrobiologická laboratoř vybavena ještě dalšími speciálními přístroji.

Váhy

Laboratoř musí být vybavena dostatečným množstvím kvalitních vah, které jsou pravidelně kontrolovány a kalibrovány. Nejčastěji používáme váhy s přesností ±0,01 g sloužící k navažování složek kultivačních půd a reagencií podle receptury nebo k navažování zkušebního vzorku. V případě větších navážek se používají digitální váhy s přesností minimálně 0,1 g a možností navážky do 400 g. Pro navážky velmi malé, nižší než 2 g se používají analytické váhy s citlivostí 0,1 mg.

Čtěte také: Principy sterilizace nebezpečných odpadů

pH Metr

Přístroj k měření pH hodnot vodných roztoků. V mikrobiologii se používá nejčastěji k měření pH při přípravě živných půd, ústojných roztoků, reagencií, nebo k měření pH vzorku potravin. pH metry musí být pravidelně kalibrovány a musí mít dostatečnou měřící citlivost, nejčastěji jsou pH metry schopné měřit s přesností 0,1 pH jednotky.

Další využívanou technikou měření pH živných medií je používání indikátorových papírků.

Vodní lázeň

Je určena k šetrnému způsobu ohřívání nebo vaření, které má být pozvolné a často nemá překročit danou teplotu. Nádoba s ohřívanou látkou je nejčastěji vložena do vhodné nádoby s vodou a tím je oddělena od přímého kontaktu se zdrojem tepla (např. plamen kahanu, elektrický vařič).

Vodní lázeň tedy umožňuje temperaci a setrvání po určitou dobu na zvolené teplotě. Nejčastěji se využívá k inaktivaci vzorků při stanovení sporulujících mikroorganismů, pro udržování rozehřátých agarových půd, k tepelnému ošetření vzorků (pasteraci), k inkubaci naočkovaných tekutých kultivačních půd.

Čtěte také: Liberecký kraj a kvalita ovzduší

Homogenizátor

Zařízení, které se používá při úpravě vzorků, které nemají tekutou konzistenci, k dezintegraci vzorků tuhé konzistence, nejčastěji při přípravě inokula a následných ředění před jejich očkováním. Používají se dva typy homogenizátorů, rotační a peristaltický. Velikost ředícího sáčku by měla být dvojnásobná oproti objemu vzorku.

Použití homogenizátoru upravuje ČSN ISO 6887 - 1 Mikrobiologie potravinového řetězce - Příprava analytických vzorků, výchozí suspenze a desetinásobných ředění pro mikrobiologické zkoušení - Část 1: Obecná pravidla pro přípravu výchozí suspenze a desetinásobných ředění.

Čtěte také: Elektromotory a znečištění: Překvapivé výsledky

Třepačka

Jedná se nejčastěji o mechanická míchadla, která slouží k dokonalému promíchání tekutin, vzorků, vytvoření suspenze mikrobiálních buněk v tekutině. Např. univerzální třepačky typu „vortex“ jsou určené pro intenzivní třepání jednotlivých zkumavek. Jedná se o zařízení umožňující homogenní mísení různých tekutin nebo vytvoření suspenze bakteriálních buněk v tekutině, jehož princip je založen na excentrickém rotačním pohybu obsahu zkumavky.

Mikroskop

Mikroskop je optický přístroj, díky kterému jsme schopni vidět nepatrné předměty a mikroorganismy. Je nezbytnou součástí mikrobiologických laboratoří.

Plynový/lihový kahan

Plynový kahan, případně lihový kahan se používá k vytvoření a udržení ochranné zóny v okolí pracovního místa a tím k vytvoření aseptického prostředí, dále ke sterilizaci očkovacích kliček a jehel žíháním, opalování hrdel zkumavek a nádob, sterilizaci vzorkovacích pomůcek při odběru vzorků. Pro odběr vzorků v terénu lze použít plynové opalovací (flambovací) pistole.

Termostaty (inkubátory)

Termostaty (inkubátory) jsou speciálně upravené skříně s vyhřívaným vzdušným prostorem. Aby se uvnitř termostatů udržela konstantní teplota, jsou opatřeny tzv. termoregulátorem. Používáme je v mikrobiologické laboratoři především ke kultivaci mikroorganismů, které pro svoji fyziologickou činnost potřebují vyšší teploty, nejčastěji nad 20 °C. Termostaty můžou být vybaveny i možností modifikace kultivační atmosféry.

Počítačka kolonií

Zařízení k počítání kolonií. Můžou být automatické nebo manuální. Většinou vybavené osvětlovacím systémem s temným pozadím, lupou a mechanickým nebo digitálním počítadlem.

Chladničky a mrazničky

Chladničky jsou různého typu. Slouží k uchovávání vzorků určených k rozboru, sterilních živných půd, reagencií, suplementů nebo kultur mikroorganismů. Také je používáme ke kultivaci psychrofilních mikroorganismů při nízkých teplotách od 0 - 15 °C. Místo chladniček bývají v mikrobiologických laboratořích také chladicí pulty.

Chladničky jsou používány odděleně pro uchovávání:

• neinokulovaných kultivačních půd (zásoba) a reagencií
• vzorků určených ke zkoušení
• mikrobiálních kultur a naočkovaných půd

Mrazničky jsou určeny k uchovávání testovaných vzorků, některých reagencií a některých testů určených ke skladování při teplotě -20 °C. Hluboko mrazicí boxy, v nichž je dosahováno teploty cca -80 °C slouží nejčastěji k dlouhodobému uchovávání mikrobiálních kultur.

Sterilizace a dezinfekce v mikrobiologické laboratoři

Sterilizace a dezinfekce jsou klíčové procesy pro zajištění bezpečnosti a spolehlivosti výsledků v mikrobiologické laboratoři. Následující zařízení a metody se používají k dosažení sterilního prostředí a eliminaci kontaminace.

Germicidní (UV) lampy

Germicidní (UV) lampy jsou zářivky vyzařující krátkovlnné UV (ultrafialové záření), které se nejčastěji používají ke sterilizaci ploch a vzduchu nebo k vyhodnocování fluorescence. Jejich účinnost závisí na vlnové délce vyzařovaného UV záření a proto je nelze zaměňovat.

Podle vyzařované vlnové délky rozeznáváme:

• UV lampy k vyhodnocování fluorescence (emitují záření o vlnové délce 360 nm)
• UV lampy způsobující narušení buněčných struktur (emitují záření o vlnové délce 253,7 nm)

Dekontaminace prostředí musí vždy probíhat bez přítomnosti osob v daném prostoru, aby nedošlo k poškození jejich zdraví (poškození oční rohovky, poškození kůže), proto je nutné upozornit na zákaz vstupu do místnosti v době působení UV lampy. Záření dopadá na povrch předmětů a ploch, čímž dochází ke snížení počtu mikroorganismů na povrchu i ve vzduchu. Lampa může být umístěna na stropě, stěně, může být mobilní nebo může být součástí očkovacích boxů.

Sterilizační zařízení

Pomůcky určené pro mikrobiologický rozbor musí být sterilní až do doby jejich použití, čehož dosáhneme správnou přípravou pro sterilaci a správně zvolenou sterilací. Laboratorní sklo jako zkumavky, baňky, láhve, odměrné válce, Petriho misky, musí být před sterilizací opatřeno víčkem nebo překryto alobalovou krytkou, případně zabaleno do papíru. Skleněné pipety, tyčinky, hokejky pinzety, skalpely, nůžky a další pomůcky sterilizujeme uložené ve vyhovujících nádobách, tubusech nebo zabalené v alobalu nebo papíru.

Sterilizaci provádíme podle účelu v různých typech sterilizátorů.

Autokláv

Autokláv je hermeticky uzavíratelná tlaková, kovová nádoba, v níž dochází k zahřívání za přetlaku a tím je možné dosáhnout teploty vyšší než 100 °C (přetlaku 0,1 MPa odpovídá teplota 121 °C). Autokláv lze nastavit na předepsanou teplotu i dobu sterilace. Nejčastěji ho využíváme ke sterilizaci většiny živných půd, roztoků, některých pomůcek, k dekontaminaci použitých pomůcek, použitých živných půd po kultivaci, k inaktivaci infekčního materiálu. Nejčastěji používaná doba záhřevu je 15 - 30 minut, v závislosti na objemu nádoby.

Kochův parní sterilizátor

Jedná se nejčastěji o nerezovou nádobu s dvojitým dnem sloužící ke sterilizaci v proudící páře za atmosférického tlaku, který umožňuje dosáhnutí teploty 100 °C. Touto teplotou se inaktivují pouze vegetativní buňky. Spory jsou odolnější a teplotu varu přežívají, proto je nezbytný opakovaný záhřev, tzv. frakcionovaná sterilace. Běžně se používá k rozváření živných půd, k frakcionované sterilizaci kultivačních médií, k dekontaminaci naočkovaných živných půd.

Horkovzdušný sterilizátor

Skříňové zařízení s nerezovou komorou, které umožňuje rychlé a přesné sušení, ohřev a sterilizaci v mikrobiologické laboratoři. Sterilizačního účinku se dosahuje působením suchého horkého nuceně proudícího vzduchu, při stanovené teplotě a délce sterilizační expozice. Běžně se používají teploty 160 - 180 °C po dobu nejméně 60 minut. Tímto způsobem sterilizujeme laboratorní sklo a pomůcky ze skla nebo kovu.

tags: #sterilizace #vzduchu #mikrobiologická #laboratoř #metody

Oblíbené příspěvky:

• Technická seismická aktivita v ČR
• Řešení problémů s emisemi u Ignise
• Aktivity pro školu v přírodě
• Sběrná místa elektroniky Sokolov
• Odpadové kontejnery ve Slatine